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生物安全櫃的選擇和使用





新聞詳情

在臨床實驗室,操作感染性標本時或作病原體分離培養、製備菌種時會因為樣品的振蕩、搖動、傾注、攪拌、移液等操作或液體的灑落,產生肉眼看不見的直徑<5/zrn的氣溶膠或產生直徑為5~100腫的液滴,這些微粒中含有活的致病微生物,可以被操作者吸入或汙染工作台麵上的其他樣品。生物安全櫃是一種設備,它的作用就是有效地降低實驗室獲得性感染的機會,減少人與樣品或樣品與樣品之間交叉汙染的機會,用於保護操作人員,保護實驗室環境,保護實驗材料的生物安全。

 

 

 

 

生物安全櫃的種類及特點

 

 

1.Ⅱ級生物安全櫃

  Ⅱ級生物安全櫃又稱為層流生物安全櫃。與工級生物安全櫃不同之處是進入

的空氣先經HEPA過濾,保證覆蓋台麵上的空氣是無菌的,不僅提供個人防護,也保護樣品不受汙染。Ⅱ級生物安全櫃共分Ⅱ級A和Ⅱ級B型2種,又可進一步再分為Ⅱ級A ₁、Ⅱ級A ₂Ⅱ級B ₁、Ⅱ級B₂型。Ⅱ級生物安全是自遏型的。流動空氣中的70%可以反複循環再利用。此種生物安全櫃適合於細胞或組織培養、接觸2~3級危險等級病原體的操作,如果穿正壓防護服可在Ⅱ級生物安全櫃上從事接觸4級危險等級感染因子的操作。

 

(1)Ⅱ級A型生物安全櫃

    Ⅱ級A型生物安全櫃(圖1)有1個內置風機將實驗室空氣以0.38 m/s

的速率吸入安全櫃,通過HEPA濾器後向下,在距工作台表麵6.18 cm處分開,一半通過前麵的排風格柵,另一半通過後麵的排風格柵。所有實驗中產生的氣溶膠或液滴均被向下氣流帶走。氣流經排出通道到達安全櫃頂部的2個HEPA濾器之間,此時,約70%的氣體經供風HEPA過濾器重新返回櫃內操作區域被再利用,其餘30%的氣體經排風過濾器後被排到實驗室再反複利用,或通過建築物的排風係統排到外界。

 

 

(2)外排風Ⅱ級

    A2型、B1型、B 2型生物安全櫃外排風Ⅱ級A2型、B1型、B 2型生物安全櫃都由Ⅱ級A1型生物安全櫃變化而來。這些生物安全櫃各有特點(見表2),包括從開口吸人空氣的速度、工作台麵上再循環的空氣量、櫃內空氣的排出量、安全櫃的排風係統、壓力裝置,不同型別的生物安全櫃可用於不同的實驗目的(表1)。

    Ⅱ級生物安全櫃A型與B型的差異在於:覆蓋工作台表麵的循環氣體和排出氣體的量不同,排出係統不同,詳細材料可以從製造商的說明書中獲得(圖2)。

 

2.Ⅲ級生物安全櫃

    Ⅲ級生物安全櫃(圖4)整個環境是完全密閉的,進入的氣體經HEPA過濾,排

出的氣體經2層HEPA過濾。有1個專門的係統保持櫃內壓力在124.5Pa,呈負壓狀態,可提供最好的個人防護作用,用於4級危險程度病原體的操作。實驗時可容2位操作人員將手伸人手套箱內進行操作。櫃旁配備1個可以滅菌的裝有HEPA過濾排風裝置的傳遞箱。櫃底下有化學消毒劑浸泡的盒子,安全櫃可與雙門的高壓滅菌器連接,接受已滅菌的物品並將用過的材料移出安全櫃作滅菌處理。可以將幾個手套箱連在一起以增大工作麵積。Ⅲ級生物安全櫃適用於Ⅲ級或Ⅳ級生物安全水平的實驗室。

3.生物安全櫃的通風連接

    Ⅱ級A1型和A2型外排式生物安全櫃有“套管式”或“傘形排氣罩式”的連接。套管安裝在安全櫃的排風管上,將安全櫃內排出的氣體,引入建築物的排氣係統。在套管與安全櫃排風管之間留有1個直徑差為2.5 cm的開口,以便讓實驗室內的空氣一起抽人建築物的排風係統中。建築物的排風能力必須能滿足房間和櫃中排風的要求。套管必須是可拆卸的或設計成可對生物安全櫃進行操作測試類型。通常,建築物氣流的波動對套管式連接的生物安全櫃的功能不會有太大的影響。

    Ⅱ級B1和B2型生物安全櫃通過硬管,亦即沒有任何開口地牢固地連接到建築物的排風係統,或者最好是連接到專門的排風係統。建築物排風係統的排風量和靜壓必須與生產商所指定的要求正好一致。對硬管道連接的生物安全櫃進行認證時,要比將空氣再循環送回房間或采用套管連接的生物安全櫃更費時。

 

 

4.生物安全櫃的選擇

    購買生物安全櫃時應考慮所提供的生物防護作用是針對操作人員個人的還是針對實驗樣品的;若是針對操作人員的防護應明確是針對病原微生物的還是針對有毒化學物質或兩者兼而有之。若是針對病原微生物的還應強調微生物的生物危害級別;若是針對有毒化學物質的可按照以下原則作選擇:工級或Ⅱ級A型生物安全櫃中不進行揮發性或毒性化學物質操作。Ⅱ級B1型生物安全櫃隻可用於少量的揮發性或毒性化學物質的操作,如要進行一定量的揮發性或毒性化學物質的操作必須使用Ⅱ級B2型生物安全櫃。不同型別的生物安全櫃排氣特點不同,見表1。

    

生物安全櫃的正確使用和安放

 

 

1.安放

    進入生物安全櫃的空氣速率約是0.45 m/s,按照這種速率,氣流的完整性很容易受附近人員的走動、窗戶的開關、門的開啟和關閉、空調運行等因素的影響。為避免上述因素的幹擾,生物安全櫃應放在遠離人員活動、物品流動以及可能會擾亂氣流的地方。為了方便起見,應在安全櫃的後麵、左右兩側麵各留30 cm的空間,以利於安全櫃的維護。上端應留30~35 cnl空間,以便準確測量空氣通過排風過濾器的速度及排風過濾器的更換。

 

 

2.操作人員

    使用生物安全櫃時,操作人員手臂的伸入或取出時應緩慢,垂直於前端開口處,從而保證安全櫃前端氣流的完整性。應在手或胳膊伸入櫃中1 min後開始操作,以便安全櫃對手或胳膊表麵的空氣進行淨化處理。實驗所需器材應一次性放人生物安全櫃,盡量減少或限製操作人員手在安全櫃中的進出次數。

3.實驗材料的放置

    Ⅱ級生物安全櫃前端開口處嚴禁被紙張、設備或其他物品覆蓋。物品放人生物安全櫃後,表麵要用70%的乙醇擦拭。櫃內應備有1塊浸過消毒劑的毛巾,以便蘸吸濺出的液體。實驗材料盡量放在櫃的後麵,笨重的物品放在一邊,產生氣溶膠的物品也應放在櫃的後麵。實驗器材應按順序從清潔的排放到汙染的。汙染的實驗材料不。應隨時拿出櫃外,操作者的手也不應頻繁地進出安全櫃。

4.操作和維持

    大多數的生物安全櫃設計成一天24 h開機,調查發現連續開機有利於控製實驗室灰塵和粒子。Ⅱ級A型不用時可以關閉。Ⅱ級B型在使用時要保持實驗室空氣平衡,因此一天中若有數個操作過程,其間不應中斷運行。實驗開始前5 rain就應啟動生物安全櫃,淨化局部空氣。使用中若出現任何故障均應及時向上級人員報告並請專職技術人員維修。

5.紫外線

    生物安全櫃中不需要紫外燈。假女盯要用,每周應對燈管作清潔,除去塵埃,保證殺菌效果。應定期監測紫外燈的輻射強度。要防止紫外線對眼睛或皮膚的灼傷。

 

 

6.明火

    生物安全櫃內近似無菌的環境中應避免使用明火,一方麵它可幹擾氣流運行,其次,若操作中使用揮發性或易燃物質時會造成危險。操作時需用接種環的,盡可能地用一次性的塑料接種環,使用金屬接種環的應該用微型燃燒器或電爐滅菌而不應該使用明火。

7.溢出

    在實驗室工作的每一個人都應熟知含微生物的樣品溢出時的處理程序。一旦生物安全櫃中發生有生物危害的物品溢出時,應在安全櫃處於工作狀態下立即進行清理。要使用有效的消毒劑,並在處理過程中盡可能減少氣溶膠生成。實驗完畢後,櫃中所有接觸病原體的材料均應作消毒滅菌處理。

 

 

8.清潔和消毒

    工作完畢後,櫃中所有的物品都應清除表麵汙染並移出櫃外,櫃內工作台表麵和櫃的內壁應用含氯石灰(漂白粉)或70%乙醇消毒。若用腐蝕性的化學劑消毒後還應用滅菌水再擦洗。關機前應運行5 min,以便對殘留氣體進行淨化。

9.清除汙染

    濾膜更換之前生物安全櫃要由專業人員用甲醛熏蒸消毒。

10.個人防護設施

    使用生物安全櫃的操作人員應穿工作服。在生物安全1~2級實驗室中工作的人員可穿普通的工作服;在3~4級實驗室工作的人穿反背式實驗隔離衣具有更好的保護效果。手套應能包住腕關節上的防護服。有些操作可能要戴口罩和眼罩。

 

 

11.警報

    生物安全櫃有發出1種或2種警報的功能。一當窗框移動時,警報會響,表明操作者將窗框移到一個不合適的地方去了,糾正以後警報解除。氣流警報表明櫃中正常氣流運行模式中斷,對操作者的保護作用和對樣品防汙染的作用減至最低,存在危險。警報響時,應立即停止工作並迅速報告上級人員。作為製造商,在產品的使用說明書的操作部分應詳細論述這一內容,對有關人員使用生物安全櫃的培訓材料中也應有此內容。

12.生物安全櫃的認證

    每台生物安全櫃功能的完整性和操作的有效性能都應作檢定。安裝時應按國家或國際標準檢定,以後應根據製造商說明書定期由專職技術人員檢定。對生物安全櫃使用有效性的評價應包括以下內容:功能完整性實驗,HEPA濾器密封性試驗,對向下氣流速度、正麵氣流速度、負壓/換氣次數、氣流的煙幕模式,以及警報和互鎖係統進行測試。還可選擇漏電、光照度、紫外光輻射強度,噪音級別,振動性等試驗。檢測人員要經過專門的培訓,采用專門的技術和儀器設備。建議由有資質的專業人員來進行測試。

    對醫學實驗室的管理人員而言,正確選擇生物安全櫃的類型,合理安放,正確使用,每年認證是一·個複雜但又必要的過程。這些活動應在有經驗並訓練有素的專家的指導下進行。這些專家應熟悉相關文獻,受過與生物安全櫃有關方麵的培訓。作為操作人員則應在使用前接受操作、保養、維護的正規培訓。

















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